Общие реагенты в культуре клеток
Когда клетки или ткани животных покидают организм для культивирования вне организма, необходимо обеспечить их различными питательными веществами, необходимыми для роста, и различными реагентами, необходимыми для лучшего роста клеток in vitro. В этом выпуске я кратко расскажу о некоторых компонентах реагентов, используемых в процессе культивирования клеток, и об их функциях.
1. Состав среды для культивирования клеток
(1).Основная культуральная среда
Общие базальные среды в основном включают MEM, DMEM и RPMI, которые в основном обеспечивают буферные системы, включая глюкозу, аминокислоты, воду, микроэлементы и бикарбонат натрия.
● Глютамин
Это незаменимая аминокислота, необходимая для роста клеток и участвующая в синтезе белка и метаболизме нуклеиновых кислот.
● Индикатор феноловый красный
Обычно используемый кислотно-щелочной индикатор показывает желтый цвет, когда он кислый, красный, когда он нейтральный, и фиолетовый, когда он щелочной. Феноловый красный используется как индикатор значения рН среды.
● Буферная система карбонат/PH
Физиологическая буферная система pH. Из-за выработки кислоты во время клеточного метаболизма HCO3- в среде будет постепенно потребляться, поэтому CO2 необходимо вовремя пополнять, чтобы поддерживать pH в определенном диапазоне.
(2). Животная сыворотка
Добавьте 2%-20% сыворотки к основной среде, чтобы сформировать полную среду. Сыворотка может не только обеспечивать клетки основными питательными веществами, необходимыми для роста, но также содержать важные компоненты, участвующие в клеточном метаболизме, такие как факторы роста, гормоны, микроэлементы и ионы.
(3). Антибиотики
Чтобы предотвратить заражение клеток в процессе культивирования, в полную среду обычно добавляют пенициллин-стрептомициновую смесь, то есть двойное антитело. Пенициллин в основном эффективен против грамположительных бактерий, а стрептомицин эффективен против многих грамотрицательных бактерий. .
2. Трипсин-ЭДТА
Трипсин может гидролизовать белок между клетками, а затем разделять клетки. ЭДТА представляет собой химический хелатирующий агент с низкой токсичностью и оказывает дискретное воздействие на прикрепившиеся клетки. Когда они используются в комбинации, эффективность рассеивания клеток выше. Этот шаг называется пищеварительными клетками. Для разных клеток предъявляются разные требования к температуре, времени и концентрации трипсина при его использовании. Если пищеварение недостаточно, клетки не могут быть переварены, а чрезмерное пищеварение приведет к повреждению клеток. Поскольку сыворотка в среде может снижать активность трипсина, для прекращения переваривания клеток обычно используют полную среду.
3. Буфер PBS
PBS представляет собой забуференный фосфатом физиологический раствор с солевым балансом и регулируемым буферным эффектом pH. Обычно его используют для промывания клеток и поддержания осмотического давления в клетках.
4. Диметилсульфоксид (ДМСО)
Важный проникающий защитник клеток и важный компонент жидкости для криоконсервации клеток. В процессе криоконсервации клеток ДМСО может быстро проникать через клеточную мембрану и проникать в клетку, снижать температуру замерзания, задерживать процесс замораживания, повышать концентрацию ионов в клетке, уменьшать образование кристаллов льда в клетке и уменьшать клеточную повреждать.
5. Ингибиторы микоплазмы
Заражение микоплазмой является распространенным источником заражения в процессе культивирования клеток. Тем не менее, ингибиторы микоплазмы могут быть использованы для устранения микоплазмы в клеточной жидкости на начальном этапе заражения, так что эксперимент может быть продолжен.
6. Краситель трипановый синий
Биологический реагент для окрашивания, обычно используемый для определения целостности клеточной мембраны. Из-за потери целостности клеточной мембраны и повышенной проницаемости мертвые клетки могут быть окрашены трипановым синим в синий цвет, в то время как живые клетки не будут окрашиваться, поскольку их клеточные мембраны не повреждены, что может исключить попадание трипанового синего в клетку. Живые и мертвые клетки можно отличить по цвету клеток под микроскопом, что удобно для подсчета живых клеток.