I. Что такое культуральный флакон?
Культуральный флакон — это распространенный лабораторный инструмент, используемый для культивирования клеток. Он изготовлен из высококачественного полистирола (ПС) с использованием сверхточных форм и полностью автоматизированных производственных процессов. Изделие используется для лабораторного культивирования клеток; его превосходные оптические свойства облегчают микроскопическое наблюдение, а поверхность обработана ТС для лучшей адгезии клеток.
II. Внесение клеточной суспензии в культуральный флакон
1. Смешивание клеточной суспензии: Приготовьте клеточную суспензию в соответствии с требуемой экспериментальной концентрацией и тщательно перемешайте ее в культуральном флаконе, сосуде для культивирования или другой емкости.
2. Используя пипетку или пипетку Пастера, медленно и равномерно введите клеточную суспензию в культуральную колбу, избегая разбрызгивания или пенообразования. (Для многослойных культуральных колб особое внимание следует уделять равномерному распределению жидкости; наклон или вращение колбы помогут обеспечить равномерный поток жидкости в каждый слой.)
3. Осторожно поместите культуральную колбу на устойчивую рабочую поверхность, убедившись, что гладкая плоская сторона обращена вверх, а сторона с градиентом — вниз (конструкция, позволяющая штабелировать колбу, облегчает обращение с ней).
4. Поместите культуральную колбу в подходящий инкубатор и установите соответствующую температуру (например, 37℃), влажность и концентрацию газа (например, 5% CO₂).
5. Дайте клеткам расти в культуральной колбе в течение определенного времени.
III. Замена культуральной среды
1. Удаление старой культуральной среды: При удалении культуральной среды наклоните колбу под углом 45 градусов гладкой стороной к себе. Осторожно удалите старую культуральную среду с помощью пастеровской пипетки или обычной пипетки, стараясь не сместить прикрепившиеся клетки. Если в культуральной среде много взвешенных клеток или примесей, промойте клетки один или два раза фосфатно-солевым буфером (PBS), чтобы удалить эти примеси.
2. Добавление новой культуральной среды: После удаления старой культуральной среды добавьте в культуральную колбу необходимое количество культуральной среды. Добавляйте среду со стенок колбы, чтобы избежать прямого воздействия на прикрепившиеся клетки. Одновременно количество добавляемой свежей культуральной среды следует определять исходя из плотности клеток и скорости их роста, чтобы обеспечить нормальный рост клеток.
IV. Сбор клеток
1. Удаление старой культуральной среды: Осторожно отсосите старую культуральную среду из культуральной колбы, добавьте необходимое количество PBS-буфера и аккуратно встряхните, чтобы смыть остатки культуральной среды, убедившись, что поверхность клеток чистая.
2. Переваривание и прекращение клеточного цикла: Добавьте необходимое количество трипсина (≥3 мл) для переваривания в течение 2-3 минут, затем прекратите переваривание с помощью культуральной среды, содержащей сыворотку.
3. Сбор клеток: Перенесите клеточную суспензию в центрифужную пробирку с помощью пипетки (избегая образования пены) и центрифугируйте на соответствующей скорости (например, 800 об/мин) в течение 5 минут, чтобы клетки осели на дно пробирки.
4. Сбор клеточного осадка: После центрифугирования осторожно удалите надосадочную жидкость из центрифужной пробирки (клеточный осадок не выбрасывайте). Соберите клеточный осадок из центрифужной пробирки и продолжите дальнейшую обработку, необходимую для эксперимента.