Рисунок 1. Схематическая диаграмма твердофазного полипептида.
В 1963 г. Меррифилд предложил метод твердофазного синтеза пептидов, который открыл широкое поле для исследований пептидов и значительно способствовал развитию молекулярной биологии и других областей. По этой причине Меррифилд был удостоен Нобелевской премии по химии в 1984 году.
С 1990-х годов, с постепенным развитием технологии синтеза полипептидов, все больше и больше активных полипептидов разрабатываются и широко применяются в областях медицины, пищевых продуктов, косметики, сельского хозяйства, животноводства и так далее. Также широко используется твердофазный метод синтеза полипептидов. В этой статье твердофазный синтез и расщепление пептидов представлены в соответствии с твердофазным реактором для синтеза пептидов.
Рис. 2 Полное применение реактора твердофазного синтеза полипептидов в полевых условиях
I. Растрескивание смолы
я. Подача
Добавление смолы в твердофазный синтез, добавление ДХМ для набухания, слив, добавление ДМФА для промывки, после промывки, слив для ожидания.
II. Конденсация
Растворение аминокислоты в определенном объеме ДМФА, добавление конденсирующего агента для активации, помещение в твердофазный синтезатор, добавление ДМФ до реакционной концентрации и перемешивание для реакции.
III. Снятие защитной группы. Степень реакции определяли реактивом Кайзера. После завершения реакции растворитель откачивали, а затем промывали ДМФА. Добавляли раствор PIP/DMF для удаления защитной группы. Степень реакции определяли реактивом Кайзера. После завершения реакции растворитель откачивали, а затем промывали ДМФА, добавляя следующую аминокислоту.
iv. Цикл конденсации
Последовательное соединение аминокислот в соответствии с последовательностью смолы, выполнение операции цикла конденсации в соответствии со стадиями «снятие защиты-промывка-активация аминокислот-подача конденсации-промывка» и завершение конденсации оставшихся n аминокислот в соответствии с аминокислотной последовательностью .
я. Разрядка
После синтеза смолу перекрестно промывали изопропиловым спиртом и дихлорметаном, чтобы завершить усадку смолы и выгрузку в лоток из нержавеющей стали.
II. Сушка смолы
Сушка смолы в вакуумном сушильном шкафу при комнатной температуре, взвешивание после сушки и расчет выхода.
III. Утилизация органических отходов, централизованная очистка.
IV. Клиринг
Оператор должен вовремя очистить площадку после операции.
I. Растрескивание смолы
я. Жидкий препарат
Приготовьте этот раствор для лизиса в соответствии с пропорцией компонентов раствора для лизиса и заранее поместите раствор для лизиса в морозильную камеру для хранения в холодильнике.
II. Подача
Добавление пептидной смолы в реакционный котел, добавление предварительно охлажденной жидкости для крекинга и перемешивание для реакции.
III. Разрядка
Слив этого реакционного раствора после крекинга, фильтрация для удаления смолы и промывка ТФУ.
IV. Концентрация
Перенесите эту крекированную жидкость в роторный испаритель для концентрирования до небольшого объема при комнатной температуре.
v. Осадки
Концентрированный реакционный раствор выливают в предварительно охлажденный метил-трет-бутиловый эфир (сокращенно эфир) и перемешивают для осаждения большого количества твердых веществ.
ви. Центрифугирование
Мутную жидкость центрифугируют и промывают предварительно охлажденным эфиром.
я. Сушка сырых пептидов
Очищенный сырой пептид переносили в вакуумный сушильный шкаф для сушки при комнатной температуре.
II. Утилизация органических отходов, централизованная очистка.
III. Клиринг
Оператор должен очистить площадку вовремя после операции.
Рисунок 3 Полный комплект твердофазного котла для расщепления полипептидов
В реальном производственном процессе крекинг-сырой пептид также должен подвергаться таким процессам, как очистка, концентрирование, фильтрация и сушка вымораживанием, которые не будут подробно описаны в этой статье.
В настоящее время процесс синтеза более коротких пептидных цепей является относительно зрелым, в то время как для белковых веществ с большей молекулярной массой и более длинными пептидными цепями технология твердофазного синтеза имеет определенные ограничения, а между тем существуют такие проблемы, как высокая стоимость и сопровождаются побочными реакциями. Поэтому на основе твердофазного синтеза пептидов еще предстоит найти новые пути.
