Во-первых, время центрифугирования
Время центрифугирования является очень важным фактором, влияющим на центробежный эффект. Время центрифугирования, необходимое для различных способов центрифугирования, будет различным. Ниже приведено подробное введение дифференциального центрифугирования и центрифугирования с градиентом плотности и центрифугирования с градиентом плотности. Для дифференциального центрифугирования время центрифугирования относится ко времени, когда определенная частица полностью оседает на дне центрифужной пробирки; для центрифугирования в градиенте изоплотности время центрифугирования относится к времени равновесия, при котором частица полностью достигает точки изоплотности; Время центрифугирования центрифугирования в градиенте плотности относится ко времени формирования четко определенной зоны. Для последних двух методов центрифугирования требуемое время формирования зоны или время равновесия является сложным и может быть определено после испытания.
Во-вторых, центробежная скорость
Скорость вращения центрифуги в основном определяется скоростью вращения ротора и радиусом вращения частиц. При описании центробежных условий это часто выражается относительным полем центробежных сил. В реальной работе данные поля центробежных сил относятся к среднему значению, то есть относятся к полю центробежных сил частиц в точке в растворе центрифугирования.
В-третьих, pH и температура среды центрифуги
Значение рН среды для центрифугирования обычно устанавливается в диапазоне рН, в котором фермент стабилен. Можно использовать буферный раствор. В ходе теста производится взвешивание, и среда самой центрифуги подвергается коррозии, избегая среды с перкислотным или чрезмерным основанием.
При работе с центрифугой, помимо уделения особого внимания выбору центробежной среды, мы также должны контролировать температуру и pH раствора среды, чтобы предотвратить агглютинацию, денатурацию и дезактивацию отделенных веществ. Мы будем контролировать температуру центрифугирования примерно до 4 ° C. Для некоторых ферментов с хорошей термической стабильностью центрифугирование также можно проводить при комнатной температуре.