Метод усиления:
Изотермическая флуоресцентная ПЦР. При изотермической флуоресцентной ПЦР амплификация ДНК происходит при постоянной температуре. Это означает, что реакция протекает при единой постоянной температуре на протяжении всего процесса.
ПЦР в реальном времени: ПЦР в реальном времени, также известная как количественная ПЦР (кПЦР), использует процесс термоциклирования. Он включает в себя несколько температурных циклов, включая этапы денатурации, отжига и удлинения. Эти температурные циклы обычно контролируются термоциклером.
Контроль температуры:
Изотермическая флуоресцентная ПЦР: Как следует из названия, изотермическая флуоресцентная ПЦР поддерживает постоянную температуру во время реакции, обычно около 60-65 ℃. Это упрощает оборудование, необходимое для реакции, по сравнению с ПЦР в реальном времени.
ПЦР в реальном времени: ПЦР в реальном времени включает в себя термоциклирование, при котором температура неоднократно изменяется между разными уровнями (например, денатурация при температуре около 95 ℃, отжиг при температуре около 55-65 ℃ и удлинение при температуре около 72 ℃). Для этого требуется термоциклер с точным контролем температуры.
Метод обнаружения:
Изотермическая флуоресцентная ПЦР: обнаружение флуоресценции используется как в изотермической флуоресцентной ПЦР, так и в ПЦР в реальном времени. Однако при изотермической флуоресцентной ПЦР сигналы флуоресценции обычно обнаруживаются непрерывно без необходимости циклического переключения между различными температурными этапами.
ПЦР в реальном времени. При ПЦР в реальном времени сигналы флуоресценции измеряются после каждого цикла изменения температуры (обычно после этапа отжига/удлинения). Это позволяет в режиме реального времени отслеживать амплификацию ДНК, происходящую в процессе термоциклирования.
Приложения:
Изотермическая флуоресцентная ПЦР: этот метод подходит для определенных применений, таких как быстрое тестирование на месте оказания медицинской помощи, где простота и скорость имеют важное значение. Его можно использовать для качественного обнаружения определенных последовательностей ДНК.
ПЦР в реальном времени: ПЦР в реальном времени широко используется как для качественного, так и для количественного анализа ДНК. Он обладает высокой чувствительностью и позволяет измерить исходное количество ДНК в образце, что делает его полезным для таких приложений, как анализ экспрессии генов, количественная оценка вирусной нагрузки и генотипирование.
Таким образом, основное различие между изотермической флуоресцентной ПЦР и ПЦР в реальном времени заключается в контроле температуры и методе амплификации. Изотермическая флуоресцентная ПЦР поддерживает постоянную температуру на протяжении всей реакции и подходит для более простых и быстрых применений, тогда как ПЦР в реальном времени включает термоциклирование и используется для широкого спектра приложений количественного и качественного анализа ДНК.
